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你知道细胞冻存需要注意的细节吗?

发布时间:2022-01-17

       有一种实验室仪器在细胞生物学中,一直被研究并不断使用,那就是细胞的冷冻和解冻。这一过程也被称为超低温保存,使得能够有效地停止细胞衰亡,因为这一过程允许几乎近似的细胞批次在数月、数年甚至数十年之后使用,可大幅提高在不同时间进行的实验重现性,还有助于节省时间、资源和成本。

 超低温冷冻

细胞冻存注意事项

 

       在整个冷冻-储存-解冻过程中,面临的一项关键性挑战是确保高细胞存活率,或许更重要的是确保超低温保存细胞行为的可预测性和重现性。为此,人们制定了许多不同的指导方针和方案。

 

        在超低温保存过程中,造成细胞死亡的主要原因是胞内冰晶的形成。以错误的方式冷冻时,会在细胞内形成冰晶,这可能会损坏细胞膜和细胞器,从而大幅降低细胞恢复的可能性。

为了帮助防止形成胞内冰晶,每个细胞冷冻方案都有两项基本要求:

 

第一项基本要求是在冷冻剂中加入低温保护剂,二甲亚砜(DMSO)或甘油等化合物会穿透细胞膜,这通常会降低培养基的凝固点和玻璃转换温度,从而防止在细胞内形成冰晶。


第二项要求是缓慢冷却, 4 –70 °C 之间的临界温度范围内,以每分钟 1 °C 的速率冷却细胞悬液通常被视为最适宜于细胞存活,无论是哪种细胞类型。这是因为,以较慢的速度冷却细胞可确保首先在细胞外部形成低溶质冰晶,从而增加剩余培养基中的溶质浓度,并在渗透作用下排出细胞。这反过来可减少细胞内形成的冰晶。在受控冷冻至至少 –70 °C 的温度后,可将冻存管移入液氮储存区(–150 –196 °C,)或在 –150 °C 下运行的专用深低温冰箱内长期保存。

 

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